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UHPLC⁃Q/Exactive测定卫矛科不同属药材中12种成分的含量
实验研究 | 更新时间：2022-08-29
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    • UHPLC⁃Q/Exactive测定卫矛科不同属药材中12种成分的含量

    • Quantitative analysis of 12 chemical constituents in different genera of Celastraceae by UHPLC⁃Q/Exactive

    • 柳雨亭

      ，  

      王玉琳

      ，  

      周华

      ，  

      杨涛

      ，  
    • 上海中医药大学学报   2022年36卷第S1期 页码：246-252

    • DOI：10.16306/j.1008-861x.2022.S1.050    

      中图分类号：

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  • 柳雨亭,王玉琳,周华等.UHPLC⁃Q/Exactive测定卫矛科不同属药材中12种成分的含量[J].上海中医药大学学报,2022,36(S1):246-252. DOI： 10.16306/j.1008-861x.2022.S1.050.

    LIU Yuting,WANG Yulin,ZHOU Hua,et al.Quantitative analysis of 12 chemical constituents in different genera of Celastraceae by UHPLC⁃Q/Exactive[J].Academic Journal of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,2022,36(S1):246-252. DOI： 10.16306/j.1008-861x.2022.S1.050.

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    摘要

    目的

    采用超高效液相-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q/Exactive），建立卫矛科不同属药材中12种成分的快速定量检测方法。

    方法

    将卫矛科药材进行粉碎后过筛，甲醇超声提取。采用UPLC®HSS T3柱（2.1 mm×100 mm， 1.8 μm）、以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱，后采用配有电喷雾离子源的四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱在正离子模式下进行检测，内标法进行定量。

    结果

    该方法线性较好，线性范围广，12种化学成分在0.8~2 000.0 ng/ml范围内都有着良好的线性关系，相关系数（R2）均>0.99；样品加样回收率为97.9%~108.0%，相对标准偏差为 0.1%~1.2%。

    结论

    该法具有快速、操作简便、准确度高的优点，可用于卫矛科药材成分快速定量分析，更好的促进卫矛科药材的合理利用，扩大可使用的药材种类，为中药资源的科学开发提供一定依据。

    Abstract

    Objective： A rapid quantitative detection method for 12 chemical constituents in different genera of Celastraceae was established by ultra-high-performance liquid-quadrupole/electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry （UHPLC-Q/Exactive）.

    译

    Methods

    Different genera of Celastraceae are crushed， sieved， and extracted with methanol ultrasonically. UPLC®HSS T3 column （2.1 mm×100 mm， 1.8 μm） was used for gradient elution with the mobile phase consists of 0.1% formic acid aqueous solution as the aqueous phase and acetonitrile as the organic phase， and the detection was performed with quadrupole/electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry with electrospray ion source in positive ion mode， and internal standard method is used for quantification.

    译

    Results

    The method had good linearity and wide linear range. The 12 chemical components all had good linear relationship in the range of 0.8 ~ 2 000 ng/ml， R2>0.99. The sample spiked recoveries were 97.1%~108.0%， and the relative standard deviations were 0.1%~1.2%.

    译

    Conclusion

    This method has the advantages of rapidness， simple operation and high accuracy. It can be used for the rapid quantitative analysis of the constituents of Celastraceae， which can better promote the rational use of Celastraceae expand the available classes of herbs， and provide a certain basis for scientific development of Chinese medicine resources.

    译

    KEYWORS　Tripterygium wilfordii Hook.f； Celastraceae； UHPLC-Q/Exactive； quantitative analysis

    译

    卫矛科植物主要包括卫矛属（Euonymus），雷公藤属（Triptergium）和南蛇藤属（Celastrus）等12属200种以上［

    1］，大多具有较好的抗寒、抗盐、抗有害气体等特性［2］。大量研究表明卫矛科植物均具有显著的抗炎、抗肿瘤的活性［3-7］，但其中有些植物的毒性作用也较强，根常被当作“雷公藤”在民间广泛运用于抗炎、抗风湿和抗癌。卫矛科植物主要有两类活性或毒性成分，一类是大环精脒类生物碱和菸酸倍半萜多元醇酯类化合物；另一类重要活性成分是含有环氧基团的二萜内酯化合物，如雷公藤甲素等［8］。卫矛科植物不仅根可入药，其地上部分、叶、花、果实均具有药用价值，但是对这些不同种属的植物成分的含量是否差异，其研究相对较少，是否存在可替代雷公藤的药材也尚未可知。因此，本研究拟采用UHPLC-Q/Exactive测定15种不同属的卫矛科药材中12种雷公藤类成分的含量，比较其成分的含量差异为合理运用相关药材提供一定的科学依据。

    1 实验材料

    1.1 药物与试剂

    雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f）的根，东北雷公藤（Tripterygium regelii Sprague et Takeda）的根，大芽南蛇藤（Celastrus orbiculatus Thunb）果皮，皱果南蛇藤（Celastrus tonkinensis Pitard）地上部分，长序南蛇藤（Celastrus vaniotii （Levl.） Rehd.）地上部分，短梗南蛇藤（Celastrus rosthornianus Loes.）地上部分，疏花卫矛（Euonymus laxiflorus Champ. ex Benth.）地上部分，棘刺卫矛（Euonymus echinatus Wall.）地上部分，四川卫矛（Euonymus szechuanensis C. H. Wang）地上部分，榕叶卫矛（Euonymus ficoides）地上部分，冷地卫矛（Euonymus frigidus Wall.）地上部分，帽果卫矛（Euonymus mitratus）地上部分，大花卫矛（Euonymus grandiflorus Wall.）地上部分，中华卫矛（Euonymus nitidus Benth.）地上部分，百齿卫矛（Euonymus centidens H. Lév.）地上部分，均委托昆明植分生物技术有限公司采集于我国4个省，共15种样品，由杨涛副研究员对15种卫矛科药材进行了鉴定，其药材标本保存于上海中医药大学附属曙光医院，药材来源信息见表1。

    表1  15种卫矛科药材来源信息统计
    编号药材名称部位采集时间采集地点
    1 雷公藤 根 2020.02.18 云南省保山市腾冲市明光镇东山村
    2 东北雷公藤 根 2019.06.06 吉林省通化市吉安市
    3 大芽南蛇藤 果皮 2020.09.28 云南省昭通市盐津县普洱镇
    4 皱果南蛇藤 地上部分 2020.03.18 云南省红河州元阳县龙武镇
    5 长序南蛇藤 地上部分 2020.05.18 云南省昭通市盐津县普洱镇
    6 短梗南蛇藤 地上部分 2019.11.29 广西百色靖西市沿边公路
    7 疏花卫矛 地上部分 2020.03.30 云南省文山市马关县古林箐乡
    8 棘刺卫矛 地上部分 2020.05.18 云南省昭通市盐津县普洱镇
    9 四川卫矛 地上部分 2020.05.30 四川省甘孜州泸定县
    10 榕叶卫矛 地上部分 2019.11.29 广西百色靖西市沿边公路
    11 冷地卫矛 地上部分 2020.05.29 四川省甘孜州泸定县
    12 帽果卫矛 地上部分 2020.03.20 云南省红河州金平县
    13 大花卫矛 地上部分 2020.05.03 云南省昆明市呈贡区梁王山
    14 中华卫矛 地上部分 2020.05.17 云南省昭通市盐津县普洱镇
    15 百齿卫矛 地上部分 2020.05.18 广西省百色市田林县乐里镇
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    雷酚内酯（triptophenolide）、雷公藤内酯甲（wilforlide A）、去甲泽拉木醛（demethylzeylasteral）（批号分别为B20703、B20711、B21018），上海源叶生物科技有限公司；雷公藤甲素（triptolide）、雷公藤红素（celastrol）、雷公藤内酯酮（triptonide）、雷公藤次碱（wilforine）、黑蔓定碱（regelidine）、雷酚萜H（triptobenzene H）、雷公藤宁碱A（wilfornine A）、雷公藤三萜酸A（triptotriterpenic acid A）（批号分别为T34030F3D、C8412E9B7、T93630F3F、W70630F3C、C35H37NO8、T67630F3F、W35930F43、T29730F3F），上海吉至生化有限公司；雷公藤吉碱（wilforgine，批号为10186803），上海鼎瑞化工有限公司。柳胺酚（osalMid，批号为B02494194），美国Sigma Aldrich公司；所有对照品纯度均为HPLC级，大于98%。甲酸（色谱级，批号为G0960200），德国CNW Technologies公司；甲醇（色谱级，批号为196565），美国Thermo Fisher Scientific公司。其他试剂均为商业来源的分析纯级。

    1.2 主要仪器

    Dionex Ultimate型3000高压液相色谱（自动进样器）、Q/Exactive四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪，美国Thermo Fisher Scientific公司；Centrifuge 5427R型离心机，德国Eppendorf公司；VDRTEX-5型旋涡振荡器，中国QILINBEIER公司；色谱柱Acquity UPLC®HSS T3柱（2.1 mm×100 mm， 1.8 μm），美国Waters公司。

    2 方法与结果

    2.1 溶液配制

    2.1.1 对照品溶液配制

    精密称取12个对照品各0.1 mg，加甲醇完全溶解得到质量浓度为 200～500 μg/ml 的各成分对照品贮备液。各取对照品贮备液适量，用甲醇稀释，使各对照品的最终的质量浓度均为 2 μg/ml，即得到混合对照品溶液。精密称定内标柳胺酚，用甲醇配制成2 μg/ml的内标溶液，所有标准品溶液均于4 ℃保存备用。

    2.1.2 供试品溶液配制

    将药材打粉后过筛，精密称量各药材粉末0.5 g，平行3份，加入20 ml甲醇后超声1 h。将各药材溶液于12 000 r/min离心10 min，取上清190 μl，加入10 μl内标溶液（2 μg/ml），涡旋10 s，转移至液相小瓶备用。

    2.2 UHPLC⁃Q/Exactive检测方法

    色谱条件：流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈。梯度程序：0~3 min，55% A；3~6 min，55%~5% A；6~10 min，5% A；10~12 min，55% A。在Acquity UPLC®HSS T3柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）上进行色谱分离；柱温40 ℃，流速0.3 ml/min，进样体积3 μl。

    质谱条件：正离子模式Full MS，分辨率为70 000；扫描范围为80~1 000 m/z；鞘气流速为35 AU；辅助气流速为10 AU；毛细管温度为320 ℃；S-lens RF level 50；辅助气温度为300 ℃；喷雾电压为+3.2 kV/-2.8 kV。

    2.3 专属性考察

    按“2.2”项下色谱质谱条件，分别取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液（不含药材和对照品的甲醇溶液）各3 μl进样测定，结果阴性对照溶液在各对照品的位置上无干扰。见图 1、图2。

    fig

    图1  阴性对照溶液及混合对照品溶液色谱图

    （a）为阴性对照溶液；（b）为混合对照品溶液。1为黑曼定碱；2为雷公藤甲素；3为雷酚萜H；4为雷公藤内酯甲；5为雷公藤宁碱A；6为雷公藤内酯酮；7为雷公藤次碱；8为去甲泽拉木醛；9为雷酚内酯；10为雷公藤三萜酸A；11为雷公藤吉碱；12为雷公藤红素

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    fig

    图2  阴性对照溶液及供试品溶液色谱图

    （a）为阴性对照溶液；（c）为供试品溶液。1为黑曼定碱；2为雷公藤甲素；3为雷酚萜H；4为雷公藤内酯甲；5为雷公藤宁碱A；6为雷公藤内酯酮；7为雷公藤次碱；8为去甲泽拉木醛；9为雷酚内酯；10为雷公藤三萜酸A；11为雷公藤吉碱；12为雷公藤红素

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    2.4 线性关系考察

    精密吸取混合对照品溶液适量，加甲醇逐级稀释成系列浓度的混合对照品溶液（2 000 ng/ml、1 000 ng/ml、500 ng/ml、250 ng/ml、125 ng/ml、62.5 ng/ml、25 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、1 ng/ml、0.4 ng/ml、0.2 ng/ml、0.1 ng/ml），取190 μl，加入10 μl内标溶液（2 μg/ml）。在“2.2”项色谱质谱条件下进样测定，以对照品的峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标（Y），以进样浓度为横坐标（X），得到线性回归方程。以信噪比S/N=10的进样浓度为定量下限（LOQ），以信噪比S/N=3时的进样浓度为检测限（LOD）。实验结果表明，各成分在一定的质量浓度范围内，线性关系良好：黑曼定碱Y=1.368 3X+4.441 1，R2为0.999 3，线性范围0.2~2 000 ng/ml，定量限0.2 ng/ml，检测限0.1 ng/ml；雷公藤甲素Y=0.086 6X-0.591 9，R2为0.996 6，线性范围0.2~2 000 ng/ml，定量限0.2 ng/ml， 检测限0.1 ng/ml；雷酚萜H Y=0.091X+0.556，R2为0.997 1，线性范围0.2~2 000 ng/ml，定量限0.2 ng/ml， 检测限0.1 ng/ml；雷公藤内酯甲Y=0.068 2X-0.367 9，R2为0.997 5，线性范围0.4~2 000 ng/ml，定量限0.4 ng/ml， 检测限0.2 ng/ml；雷公藤宁碱A Y=0.431 3X+1.615 9，R2为0.999 1，线性范围0.2~2 000 ng/ml，定量限0.2 ng/ml，检测限0.1 ng/ml；雷公藤内酯酮Y=0.095 7X-0.198 6，R2为0.998 1，线性范围0.2~2 000 ng/ml， 定量限0.2 ng/ml，检测限0.1 ng/ml；雷公藤次碱Y=0.447 2X-1.762 7，R2为0.998 8，线性范围0.2~2000 ng/ml，定量限0.2 ng/ml， 检测限0.1 ng/ml；去甲泽拉木醛Y=0.031 8X-0.05 2，R2为0.999 3，线性范围0.8~2 000 ng/ml，定量限0.8 ng/ml，检测限 0.1 ng/ml；雷酚内酯Y=0.248 4X-0.087 6，R2为0.997 8，检测限0.4~2 000 ng/ml，定量限0.4 ng/ml， 检测限0.1 ng/ml；雷公藤三萜酸A Y=0.019 4X-0.099 9，R2为0.998 2，检测限0.4~2 000 ng/ml，定量限0.4 ng/ml， 检测限0.1 ng/ml；雷公藤吉碱Y=0.418 5X-0.625 3，R2为0.998 6，检测限0.4~2 000 ng/ml，定量限0.4 ng/ml，检测限0.1 ng/ml；雷公藤红素Y=0.334X-3.019，R2为0.995 6，检测限0.4~2 000 ng/ml，定量限0.4 ng/ml，检测限 0.1 ng/ml。见表2。

    表2  卫矛科药材中12个主要成分的回归方程、线性范围、LOD、LOQ
    编号成分分子式离子模式保留时间（min）线性回归方程R2线性范围（ng/ml）LOQ（ng/ml）LOD（ng/ml）
    1 黑曼定碱 C35H37NO8 + 7.54 Y=1.368 3X+4.441 1 0.999 3 2 000~0.2 0.2 0.1
    2 雷公藤甲素 C20H24O6 + 1.95 Y=0.086 6X-0.591 9 0.996 6 2 000~0.2 0.2 0.1
    3 雷酚萜H C21H28O4 + 6.20 Y=0.09 1X+0.556 0.997 1 2 000~0.2 0.2 0.1
    4 雷公藤内酯甲 C30H46O3 + 6.90 Y=0.068 2X-0.367 9 0.997 5 2 000~0.4 0.4 0.2
    5 雷公藤宁碱A C45H51NO20 + 6.50 Y=0.431 3X+1.615 9 0.999 1 2 000~0.2 0.2 0.1
    6 雷公藤内酯酮 C20H22O6 + 3.56 Y=0.095 7X-0.198 6 0.998 1 2 000~0.2 0.2 0.1
    7 雷公藤次碱 C42H48N2O18 + 6.64 Y=0.447 2X-1.762 7 0.998 8 2 000~0.2 0.2 0.1
    8 去甲泽拉木醛 C29H36O6 + 7.44 Y=0.031 8X-0.052 0.999 3 2 000~0.8 0.8 0.1
    9 雷酚内酯 C20H24O3 + 6.24 Y=0.248 4X-0.087 6 0.997 8 2 000~0.4 0.4 0.1
    10 雷公藤三萜A C30H48O4 + 6.90 Y=0.019 4X-0.099 9 0.998 2 2 000~0.4 0.4 0.1
    11 雷公藤吉碱 C41H47NO19 + 6.18 Y=0.418 5X-0.625 3 0.998 6 2 000~0.4 0.4 0.1
    12 雷公藤红素 C29H38O4 + 8.33 Y=0.334X-3.019 0.995 6 2 000~0.4 0.4 0.1
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    2.5 精密度试验

    精密吸取混合对照品溶液，加入适量内标溶液，按照“2.2”项下色谱质谱条件连续进样6次，记录峰面积。计算得到雷酚内酯、雷公藤甲素、去甲泽拉木醛、雷公藤红素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤宁碱A、雷公藤次碱、雷酚萜H、雷公藤三萜酸A、黑曼定碱，雷公藤吉碱色谱峰面积与内标峰面积比值的 RSD分别为1.3%、0.7%、1.0%、1.4%、0.4%、1.2%、1.2%、0.3%、0.2%、1.5%、1.5%、0.4%，表明仪器精密度良好。

    2.6 稳定性试验

    精密吸取雷公藤供试品溶液，加入适量内标溶液，按照“2.2”项下色谱质谱条件分别在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样分析，记录峰面积。计算得到雷酚内酯、雷公藤甲素、去甲泽拉木醛、雷公藤红素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤宁碱A、雷公藤次碱、雷酚萜H、雷公藤三萜酸A、黑曼定碱，雷公藤吉碱色谱峰面积与内标峰面积比值的 RSD分别为0.3%、1.4%、1.0%、 1.3%、2.0%、1.8%、1.3%、1.3%、0.4%、0.3%、0.3%、0.7%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

    2.7 重复性试验

    取同一批雷公藤供试品粉末，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液6份，加入适量内标溶液，按照“2.2”项下色谱质谱条件分别进样，记录峰面积。计算得到雷酚内酯、雷公藤甲素、去甲泽拉木醛、雷公藤红素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤宁碱A、雷公藤次碱、雷酚萜H、雷公藤三萜酸A、黑曼定碱，雷公藤吉碱色谱峰面积与内标峰面积比值的 RSD分别为1.6%、1.5%、1.9%、0.7%、1.6%、2.0%、1.4%、1.7%、2.0%、2.0%、1.7%、1.0%，表明该方法重复性良好。

    2.8 加样回收率试验

    精密称取已知成分含量的雷公藤根部粉末0.5 g，共5份，分别置于25 ml量瓶中，分别精密加入各对照品，混合均匀，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。在“2.2”项下色谱质谱条件进样，记录峰面积。计算得到雷酚内酯、雷公藤甲素、去甲泽拉木醛、雷公藤红素、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯甲、雷公藤宁碱A、雷公藤次碱、雷酚萜 H、雷公藤三萜酸A、黑曼定碱，雷公藤吉碱的平均加样回收率分别为97.9%、105.0%、97.1%、108.0%、101.1%、101.0%、98.5%、102.3%、100.6%、102.0%、98.8%、107.0%，RSD分别为0.6%、0.1%、0.3%、1.0%、1.2%、0.7%、0.1%、1.1%、0.3%、0.1%、0.1%、0.1%。

    2.9 样品含量测定

    取15种卫矛科药材，采用“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项下色谱质谱条件进样检测，结果见图1、图2、表3。检测的卫矛科药材一共15种，其中雷公藤和东北雷公藤这两种属于雷公藤属，除雷公藤甲素、雷酚萜H、雷公藤内酯酮未在东北雷公藤检出，其余9种成分都为雷公藤和东北雷公藤共有；这9种共有成分除了雷公藤红素含量相近，其他都有较大差异。此外，雷公藤中去甲泽拉木醛含量最高，远远高于其他11个成分。南蛇藤属药材检测了4种，为大芽南蛇藤、皱果南蛇藤、长序南蛇藤、短梗南蛇藤，其中雷公藤红素、雷公藤次碱、去甲泽拉木醛为这4种药材的共有成分，且含量最高的都是去甲泽拉木醛；均未测出雷公藤甲素、黑蔓定碱、雷公藤内酯酮。

    表 3  卫矛科不同药材中多种成分的定量测定（ˉx±s，n=3）

    药材

    名称

    药用

    部位

    		质量分数（μg/g）
    黑曼定碱雷公藤甲素雷酚萜H

    雷公藤

    内酯甲

    雷公藤

    宁碱A

    		雷公藤内酯酮

    雷公藤

    次碱

    		去甲泽拉木醛雷酚内酯雷公藤三萜酸A雷公藤吉碱

    雷公藤

    红素

    1 雷公藤 根 4.34±0.18 12.35±0.18 28.19±1.90 47.99±6.05 56.10±5.28 1.52±0.24 72.00±4.00 391.58±74.24 4.38±0.83 57.00±7.40 75.52±2.32 76.67±4.04
    2 东北雷公藤 根 1.62±0.27 – – 2.22±0.35 0.20±0.03 – 0.25±0.02 68.55±6.20 8.95±0.92 1.75±0.22 0.18±0.02 70.67±7.07
    3 大芽南蛇藤 果皮 – – 0.07±0.01 3.27±0.24 – – 0.04±0.01 23.00±6.33 0.02±0.01 1.46±0.24 0.02±0.01 2.27±0.88
    4 皱果南蛇藤 地上部分 – – – – – – 0.05±0.01 11.93±1.80 – – 0.03±0.01 0.50±0.09
    5 长序南蛇藤 地上部分 – – – – – – 0.04±0.01 3.51±0.16 – – – 0.34±0.03
    6 短梗南蛇藤 地上部分 – – 0.06±0.01 5.60±0.25 0.21±0.01 – 0.19±0.02 3.94±0.53 – 6.47±1.04 0.24±0.06 2.50±0.34
    7 疏花卫矛 地上部分 – 0.09±0.01 – 12.33±2.52 – – 6.36±0.38 4.46±0.74 0.04±0.01 11.27±1.05 0.03±0.01 0.80±0.15
    8 棘刺卫矛 地上部分 – – – 1.10±0.10 – – 1.00±0.08 3.63±0.21 – – 0.03±0.01 0.37±0.06
    9 四川卫矛 地上部分 – – 0.02±0.01 18.10±3.37 0.08±0.02 – 0.84±0.13 4.21±0.40 – 17.51±3.10 0.06±0.02 1.51±0.14
    10 榕叶卫矛 地上部分 – – – 1.22±0.22 – – 1.84±0.27 1.82±0.01 – – 0.03±0.01 0.26±0.02
    11 冷地卫矛 地上部分 – – – 6.80±1.50 – – 0.47±0.13 2.06±0.12 – 4.08±1.15 0.05±0.01 0.25±0.03
    12 帽果卫矛 地上部分 – – 0.02±0.01 1.06±0.18 – – 0.06±0.01 2.09±0.08 – 1.14±0.27 0.05±0.01 0.17±0.01
    13 大花卫矛 地上部分 – – – 0.88±0.25 – – 0.04±0.01 1.35±0.13 – – – –
    14 中华卫矛 地上部分 – – 0.03±0.01 0.37±0.13 – – 0.05±0.01 1.33±0.17 – – 0.02±0.01 0.15±0.01
    15 百齿卫矛 地上部分 – 0.21±0.02 – 9.21±0.60 – – – 1.59±0.71 – 18.32±3.06 0.02±0.01 0.20±0.02
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    卫矛属有9种，检测的药用部位大都是地上部分，共有成分为雷公藤内酯甲和去甲泽拉木醛，只有疏花卫矛和百齿卫矛中含有少量的雷公藤甲素。9种卫矛属药材均未测出黑蔓定碱、雷公藤内酯酮。雷公藤宁碱A仅在四川卫矛中测出，只有疏花卫矛含有雷酚内酯。除百齿卫矛以外，其他8种卫矛植物都含有雷公藤次碱；除大花卫矛以外，其他8种卫矛植物都含有雷公藤吉碱和雷公藤红素。

    3 讨论

    随着中医药现代化的飞速发展，中药多成分分析已经成为了中药质量评价和质量控制的核心内容，但因为中药材中的化学成分十分复杂，化学成分间因极性大小不同造成溶解性存在差异性，且存在干扰组分，所以检测方法的建立存在一定的难度。静电场轨道阱质谱具有高分辨率，高质量精度，质量范围宽，动态范围广的优点，能够进行大范围的定性和定量分析；相比于其他高分辨质谱如傅里叶变换离子回旋共振质谱、飞行时间质谱，它的尺寸更小，维护与操作更加简单［

    9］。静电场轨道阱质谱串联超高效液相色谱仪分离效率高，扫描速度快，分辨率高，灵敏度高，所建立的测定方法快速、准确；与传统采用 HPLC 测定的方法相比，样品分析时间大大缩短，同时分离度较高，峰形较好。目前中药材的定性定量研究也较多采用静电场轨道阱质谱串联超高效液相色谱仪［10-11］。

    卫矛科植物种类多样，在我国野生资源也较为丰富；但雷公藤因在免疫抑制方面的优秀表现［12-13］使得其野生资源被过度采挖而减少［14］，又在生产过程中没有得到更加充分的利用而造成了进一步的资源浪费［15］。除了合理开采以及减少生产过程的浪费等措施来保护雷公藤药材资源，还能通过扩大药源等方式促进卫矛科其他植物的应用。但目前卫矛科其他植物化学成分的相关研究较少，因此本实验采用超高效液相-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪对卫矛科南蛇藤属、卫矛属、雷公藤属这3个种属的15种植物的不同药用部位进行了12种化学成分的定量分析。研究结果表明，同属的植物化学成分的种类和含量上也有着较大的差异性。雷公藤甲素作为主要的活性成分，其在雷公藤根部中含量最多；疏花卫矛和百齿卫矛的地上部分含有少量的雷公藤甲素，而在东北雷公藤根、大芽南蛇藤果皮以及其他药材的地上部分均未检出。东北雷公藤虽常被当作雷公藤使用，但是不含有雷公藤甲素、雷酚萜H和雷公藤内酯酮，其雷公藤红素含量与雷公藤相当，而另外9种成分含量均低于雷公藤。陈一龙等［16］在对雷公藤属植物物种间的化学成分差异性研究中也发现，相较于雷公藤，东北雷公藤中雷公藤甲素的含量极低，表明东北雷公藤在药理活性上可能与雷公藤存在较大差异。另外，大芽南蛇藤果皮，皱果南蛇藤、长序南蛇藤、短梗南蛇藤、疏花卫矛、棘刺卫矛、四川卫矛、榕叶卫矛、冷地卫矛、帽果卫矛、大花卫矛、中华卫矛、百齿卫矛等12种卫矛属植物的地上部分所含雷公藤类的成分均较少，含量也较低。因此，在使用这些药材时，需要根据需求合理使用；鉴于同属植物在活性成分上依旧存有较大差异，药材的替代运用应当更加谨慎并加以更深入的研究。

    在中药材多成分分析的研究中，UHPLC-Q/Exactive应用愈加广泛，其定量方法的便捷准确使得中药材的运用更加科学合理。本文建立了一种同时定量卫矛科植物中12种成分的方法，且快速简单；旨在为卫矛科药材的使用提供一定依据，一方面根据我们所需要的活性成分寻找可替代药材，更好的实现药用植物资源的可持续发展；另一方面，不同属的药材能够对其化学成分的不同加以区分，根据化学成分种类的差异以及含量的高低进行更准确更合理的使用。

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